Патогенетически обоснованная коррекция фотостарения и дисхромий инъекционным препаратом Meso-Xanthin F199™

Григорьева Анна Александровна – врач-косметолог, сертифицированный тренер компании Premierpharm, Москва

Берзегова Лариса Вадимовна – к.м.н., врач-косметолог, ведущий спикер компании Premierpharm, сертифицированный тренер компании Premierpharm, Москва

Кожина Кристина Витальевна– к.м.н., врач-косметолог, сертифицированный тренер компании Premierpharm, Москва

Родина Юлия Алексеевна - к.м.н., врач-косметолог, сертифицированный тренер компании Premierpharm, Москва

Лоран Мария Сергеевна - врач-косметолог, сертифицированный тренер компании Premierpharm, Москва

Морозов Сергей Георгиевич – д.м.н., член-корреспондент РАН, ВРИО Директора по науке ФГБНУ НИИ общей патологии и патофизиологии РАН, Москва

Выделяют два основных независимых друг от друга механизма старения кожи: фотостарение, вызванное воздействием ультрафиолета (УФ) и хронологическое (возрастное) старение. Фотостарение зависит не от возраста пациента, а от суммарной дозы облучения и степени естественной защиты.

Под воздействием ультрафиолетовых лучей происходят значительные изменения во всех слоях кожи. В эпидермисе – гиперкератоз, изменение цветности, обезвоженность. Со временем снижается тургор кожи, появляется дряблость, постепенно формируются глубокие морщины, эластоз и актиническая пурпура. Таким образом, ксероз, гиперпигментация и морщины являются клиническими проявлениями фотостарения. В основе этих изменений лежит увеличение синтеза активных форм кислорода (АФК). сопровождается АФК повышают уровень пептида-активатора 1, стимулирующего активность матричных металлопротеиназ, что приводит к разрушению коллагена. В то же время АФК снижают содержание фактора роста TGF-β2, отвечающего за синтез нового коллагена.

Одним из защитных механизмов кожи против воздействий УФ является активная продукция меланина и перенос его из меланоцитов в кератиноциты с помощью меланосом. Меланин препятствует проникновению УФ в глубокие слои кожи и блокирует выброс АФК.

Поддержание постоянной пигментации кожи - сложный многоэтапный процесс: миграции меланобластов в ткань в течение эмбриогенеза, их жизнеспособности и дифференцировки в меланоциты, плотности меланоцитов в коже, экспрессии и функций энзиматических и структурных компонентов меланосом, синтеза различных типов меланин (эу- и феомеланина), созревания и транспортировки меланосом в дендритные отростки меланоцитов и переноса их в кератиноциты, и, наконец, от распространения меланина в супрабазальных слоях кожи.

Нарушение регуляции любого из этапов синтеза меланина может привести к потере пигментации, формированию участка кожи измененного цвета, появлению пигментных пятен и опухолей. Основным фактором, влияющим на меланогенез является УФ, который активирует УФ-чувствительные белки, стимулирующие избыточный синтез меланина. Но, независимо от эндогенной или экзогенной природы сигнала, активируется рецептор-1 к меланокортину – главный пусковой механизм меланогенеза. После его активации увеличивается экспрессия основного регулятора меланогенеза – мастера транскрипционной регуляции пигментации – MITF. Его контролирует фактор Sox10. MITF запускает экспрессию тирозина – фермента, контролирующего синтез меланина. Также MITF запускает экспрессию gp100 – фактора, регулирующего созревание меланосом и синтез эумеланина – пигмента черного цвета

Возможности косметической коррекции и профилактики дисхромий кожи в настоящий момент очень разнообразны. Для подавления гиперпигментации и аномального меланогенеза необходимо применение препаратов, способных оказать воздействие на разных этапах и уровнях регуляции синтеза меланина, механизм действия, эффективность и безопасность которых подтверждена не только клиническими, но и лабораторными научными исследованиями. Таким препаратом является Meso-Xanthin F199™, который активно применяется для эффективного решения различных эстетических проблем кожи, профилактики фотостарения и коррекции дисхромией.

Ключевой компонент препарата – каротиноид Фукоксантин F-199 (Fucoxanthin F-199) - обладает мощным эффектом воздействия на репарацию ДНК стволовых и специализированных клеток, поврежденных в условиях оксидантного стресса, при фотоповреждении и в процессе хроностарения.

Известно, что фукоксантин оказывает защитное воздействие при различной патологии. В частности, установлено, что после УФ-воздействия на мышей, фукоксантин ингибирует тирозинкиназу и снижает экспрессию мРНК MCR1 и тирозиназа-зависимого рецептора 1.

Кроме того, в состав инъекционного препарата Meso-Xanthin F199™ входят антиоксиданты, снижающие уровень АФК в коже; тиоредоксин, восстанавливающий оксилительно-восстановительный баланс в меланосомах и переключающий синтез с эумеланина на феомеланин; витамин А, ингибирующий УФ-индуцированный меланогенез; а также другие факторы, способствующие восстановлению и поддержанию гомеостаза кожи.

Для изучения in vitro эффективности и механизмов действия комбинированных препаратов в настоящее время используют первичные культуры меланоцитов и кератиноцитов и тканевые эквиваленты Меланодерм. Такой подход, позволяет оценить биоэффективность и безопасность различных препаратов, провести анализ их молекулярных мишеней и прогнозировать вероятные последствия воздействия.

Для оценки эффективности препарата Meso-Xanthin F199™, в Научно-исследовательском институте общей патологии и патофизиологии РАН (г.Москва) и Российской медицинской Академии последипломного образования Минздрава РФ (г.Москва) были проведены эксперименты с добавлением этого инъекционного препарата к органотипической культуре Меланодерм и культуре из меланоцитов кожи человека. Выбранные объекты позволили объективно оценить степень воздействия Meso-Xanthin F199™ на различные этапы меланогенеза.

Органотипическая культура была представлена тканевыми эквивалентами. Образцы для тестирования получали следующим образом: в планшет для культивирования помещалась специальная вставка для культивирования с пористой мембраной. На мембрану в дальнейшем послойно наносили разные типы клеток в необходимом соотношении. В соответствии с протоколом, образцы инкубировали до образования межклеточных связей и формирования базальной мембраны.

Результаты эксперимента на образцах Меланодерм (при добавлении Meso-Xanthin F199™ и без него) можно оценить даже визуально благодаря накоплению пигмента и потемнению образцов. На Рисунке 3 видно, как в процессе культивирования потемнели контрольные образцы (без Meso-Xanthin F199™) по сравнению с экспериментальными (с Meso-Xanthin F199™). В результате спектрофотометрического анализа высушенных образцов было установлено, что к 7 суткам концентрация меланина в контрольных образцах превышала концентрацию меланина в экспериментальных (Рисунок 4). Возникает вопрос, почему вообще происходило потемнение? В соответствии с протоколом исследования, использовалась готовая среда, стимулирующая меланогенез. В таких условиях невозможно его полное подавление, однако препарат Meso-Xanthin F199™ способствовал равномерному распределению пигмента в тканевом эквиваленте, в отличие от контрольного образца, где пигмент распределен не равномерно.

Данные общего гистологического анализа тканевых эквивалентов Меланодерм показали, что в процессе культивирования в контрольной группе происходит увеличение толщины клеточного слоя меланоцитов (стрелки) (Рисунок 5). В экспериментальной группе толщина слоя меланоцитов к 7 суткам культивирования увеличивалась незначительно (стрелки) (Рисунок 5). Это свидетельствует о том, что препарат Meso-Xanthin F199™ не подавляет пролиферацию меланоцитов.

Для дальнейшей оценки влияния Meso-Xanthin F199™ на экспрессию ключевых факторов меланогенеза: gp100, MITF, Sox10, MCR1 и TYR был проведен иммуноцитохимический анализ срезов тканевых эквивалентов Меланодерм.

В результате анализа было установлено, что в контрольной группе экспрессию MITF (мастер транскрипционной регуляции пигментации – основной регулятор меланогенеза) наблюдали уже в 1 сутки культивирования, а к 7 суткам ее выявляли во всем тканевом эквиваленте, тогда как в опытной (в присутствии Meso-Xanthin F199™), экспрессия данного транскрипционного фактора выявлялась только на третьи и незначительно увеличивалась к 7 суткам (Рисунок 6).

Процесс меланогенеза происходит в меланосомах – внутриклеточных везикулярных органеллах, с помощью которых осуществляется дальнейший трансфер пигмента в кератиноциты. За полное созревание меланосом и синтез эумеланина ответственен белок gp100. В результате иммуноцитохимического анализа было установлено, что уровень экспрессии gp100, отвечающего за созревание меланосом, снижен в опытной группе (в присутствии Meso-Xanthin F199™) по сравнению с контрольной на 1, 3 и 7 сутки культивирования.

Транскрипционный фактор Sox10 относится к ключевым «игрокам» клеточного метаболизма и регулирует множество внутриклеточных процессов, в том числе экспрессию фактора MITF, морфогенез и клеточную дифференцировку, подавляет апоптоз. Изменение экспрессии Sox10 может нарушить нормальное функционирование клетки и привести к развитию тяжелых патологических состояний. В результате анализа было установлено, что Meso-Xanthin F199™ не оказывает влияния на экспрессию Sox10.

После проведенного иммуноцитохимического анализа было установлено, что Meso-Xanthin F199™ первостепенно влияет на экспрессию фактора созревания меланосом gp100 и, в меньшей степени, воздействует на экспрессию мастера транскрипции регуляции пигментации MITF и не влияет на транскрипционный фактор Sox10.

В ходе работы было установлено, что в экспериментальных образцах экспрессия гена рецептора 1 к меланокортину (MCR1) была достоверно ниже, чем в контрольной группе на 7 сутки культивирования. Экспрессия гена тирозиназы (TYR) практически полностью была подавлена в эксперименте на 7 сутки культивирования в сравнении с контрольными образцами (Рисунок 9). Такое максимальное воздействие инъекционного препарата к последнему дню культивирования in vitro может свидетельствовать о накопительном эффекте.

Полученные данные свидетельствуют об избирательности воздействия Meso-Xanthin F199™ – он подавляет созревание меланосом и интенсивный синтез меланина, однако не блокирует основные пути меланогенеза, следовательно, не вызывает тяжелые патофизиологические осложнения.

Для подтверждения отсутствия токсичности и биобезопасности воздействия препарат Meso-Xanthin F199™ непосредственно на меланоциты, препарат добавляли в ростовую среду (в соотношении объемов: 1:10, 1:100, 1:1000), далее проводили исследование на жизнеспособность и пролиферативную активность меланоцитов. Клетки сохраняли свою жизнеспособность, морфологию, способность мигрировать и пролиферировать (Рисунок 10). Анализ поведения клеток выявил увеличение индекса пролиферации в экспериментальной группе, к которой был добавлен инъекционный препарат Meso-Xanthin F199™ в максимальной концентрации (Рисунок 11).

В итоге: в ходе исследования было установлено, что Meso-Xanthin F199™ стимулирует пролиферацию меланоцитов в культуре и не способствует увеличению числа дифференцированных меланоцитов в тканевых эквивалентах. Meso-Xanthin F199™ in vitro проявил себя как препарат с высокой биологической активностью: снижает гиперчувствительность к сигналу, активирующему меланогенез; подавляет избыточный меланогенез через супрессию тирозиназы; регулирует экспрессию мастера транскрипционной регуляции меланогенеза MITF; препятствует созреванию меланосом и синтезу эумеланина через фактор gp100 (Рисунок 12).

Результаты, полученные в ходе исследования, свидетельствуют об избирательности воздействия Мeso-Хanthin F199ТМ –подавляет созревание меланосом и интенсивный синтез меланина, однако не блокирует основные пути меланогенеза, следовательно, не вызывает тяжелые патофизиологические осложнения. Таким образом, препарат Meso-Xanthin F199ТМ является высокоэффективным и безопасным средством для профилактики фотостарнения и коррекции дисхромий.

ППОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ ПРЕПАРАТА MESO-XANTHIN F199™

В КОСМЕТОЛОГИИ:

Профилактика и терапия «увядания» кожи.

2. Терапия дисхромий и меланогенетических пятен.

3. Коррекция возрастных изменений (морщины, потеря тонуса и эластичности, гравитационный птоз I-II степени)

4. Профилактика и терапия синдрома обезвоженной кожи.

5. Подготовка кожи к пластическим операциям.

6. Реабилитация кожи в послеоперационном периоде.

7. Восстановление кожи после срединных и глубоких пилингов, лазерных шлифовок и других инвазивных процедур.

В ДЕРМАТОЛОГИИ:

Синдром постакне.

2. Синдром фенотипически жирной кожи.

3. Синдром кожи курильщика.

4. Акне 1-2 стадии (вне обострения).

5. Розацеа.

6. Розацеаподобный демодекоз.

7. Фотодерматозы, сопровождающиеся образованием меланогенетических пятен.

8. Себорейный дерматит.

9. Ксероз кожи.

ХОД ПРОЦЕДУРЫ

Провести «демакияж». Перед введением Meso–Xanthin F199TM трижды обработать кожу 0,05% раствором хлоргексидина. Возможно местное применение крема с анестетиком.

Рекомендуемая игла: 32G (0,23х4мм). Препарат не предназначен для объемного депонирования в коже.

Процедура проводится по линиям Лангера от центра к периферии (Рис. 13). Объем одного шприца 1,5 мл рассчитан на обработку 3-х зон: лица, шеи, декольте.

Техника введения:

• Множественные внутридермальные микроинъекции (техника «микробугорков»):

o в кожу лица игла вводится под углом 45° к поверхности кожи, на глубину 4 мм, с интервалом между вколами от 0,8 до 1 см. (Рис. 14, 15).

o в кожу шеи игла вводится под углом 30° к поверхности кожи на глубину 1-2 мм (Рис. 16, 17). Направление среза иглы не принципиально.

• В периорбитальной зоне возможно использование техники «микропапул» (Рис. 18):

o для повышения контроля над однократной дозой введения препарата срез иглы должен быть направлен вверх.

o диаметр папулы не должен превышать 1 мм.

o несоблюдение рекомендации может привести к выраженному отеку этой зоны лица.

После процедуры рекомендуется нанести восстанавливающую маску Meso-Wharton P199™ Post-Treatment Mask с охлаждающим эффектом (Рис. 19).

РРЕКОМЕНДОВАННЫЕ КУРСЫ ПРОЦЕДУР

 Базовый курс: 6 процедур с интервалами 7-14 дней;

 Поддерживающий курс:1 процедура Meso–Xanthin F199TМ 1 раз в 8 недель

 Повторный базовый курс: через 12 месяцев.

РЕЗЮМЕ

Применение Meso-Xanthin F199™ позволяет проводить эффективную коррекцию признаков фотостарения кожи, обеспечивает выравнивание цветности кожи, нормализацию себопродукции, интенсификацию восстановительных процессов в коже и реабилитацию кожи, в том числе и у пациентов с хроническими дерматозами, а также является высокоэффективным и безопасным средством против гиперпигментации.

Рисунок 1. Влияние УФ на меланогенез (John A. D’Orazio, Stuart Jarrett, Amanda Marsch, James Lagrew and Laura Cleary / "Recent Advances in the Biology, Therapy and Management of Melanoma" (2013)).

Рисунок 2. Эксперименты на «3D» моделях тканевых эквивалентах Меланодерм и сфероидах из меланоцитов, проведенные в Научно-исследовательском институте общей патологии и патофизиологии РАН (г.Москва) и Российской медицинской Академии последипломного образования Минздрава РФ.

Рисунок 3. Накопление пигмента в тканевых эквивалентах

Меланодерм (фотографии высушенных образцов перед спектрофотометрией).

Рисунок 4. Спектрофотометрический анализ результатов эксперимента, проведенного на образцах Меланодерм, культивируемых вместе с инъекционным препаратом Meso-Xanthin F199 и без него (*р<0,05 в сравнении с контрольной группой)

Рисунок 5. Рис.3. Гистологический анализ тканевых эквивалентов Меланодерм контрольной (А) и экспериментальной (Б) групп на 1, 3 и 7 сутки культивирования (световая микроскопия, окрашивание гематоксилин-эозин). Стрелками отмечены меланоциты.

Рисунок 6. Иммуноцитохимический анализ экспрессии MITF контрольной и экспериментальной групп на срезах тканевых эквивалентов на 1, 3, 7 сутки культивирования (лазерная сканирующая конфокальная микроскопия). Синий - ядра клеток, окрашенные Hoechst 33258; красный - MITF.

Рисунок 7. Иммуноцитохимический анализ экспрессии gp100 контрольной и экспериментальной групп на срезах тканевых эквивалентов на 1, 3, 7 сутки культивирования (лазерная сканирующая конфокальная микроскопия). Синий - ядра клеток, окрашенные Hoechst 33258; красный - gp100.

Рисунок 8. Иммуноцитохимический анализ экспрессии Sox10 контрольной и экспериментальной групп на срезах тканевых эквивалентов на 1, 3, 7 сутки культивирования (лазерная сканирующая конфокальная микроскопия). Синий - ядра клеток, окрашенные Hoechst 33258; красный - Sox10.

Рисунок 9. ПЦР-анализ тканевых эквивалентов Меланодерм. Метод ПЦР в реальном времени, RQ – относительные единицы, данные нормализовали по репортерному гену TBP. *р<0,05 в сравнении с другими разведениями на соответствующем пассаже.

Рисунок 10. Динамика пролиферации в 2D культуре. Световая фазово-контрастная прижизненная цейтраферная микроскопия.

Рисунок 11. Гистограмма значений индекса пролиферации культуры меланоцитов на 3 и 4 пассаже в трех экспериментальных (разведение препарата Meso-Xanthin F199™ 1:10, 1:50 и 1:100) и контрольной группах. *р<0,05 в сравнении с другими разведениями на соответствующем пассаже.

Рисунок 12. Воздействие Meso-Xanthin F199™ на различных участников меланогенеза

Рисунок 13. Схема введения препарата Meso-Xanthin F199™

Рисунок 14-15. Техника введения Meso-Xanthin F199™ в кожу лица

Рисунок 16-17. Техника введения Meso-Xanthin F199™ в кожу шеи

Рисунок 18. Техника введения Meso-Xanthin F199™ в кожу периорбитальной зоны

Рисунок 19. Восстанавливающая маска Meso-Wharton P199™ Post-Treatment Mask

Рисунок 20. Пациентка: 37 лет. Диагноз: дисхромия, синдром фенотипически жирной кожи.

А, Б – До процедур.

В, Г – После проведения 4 процедур Meso-Xanthin F199™ с интервалом 10 дней. Результат: уменьшение выраженности гиперпигментаций, улучшение цветности кожи, матирование кожи, сужение пор, выравнивание микрорельефа кожи, гидратация кожи.